Identificación diferencial de aislados clínicos de Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium bovis por un ensayo de RCP múltiple

Abstract

Mycobacterium tuberculosis es el agente causal de tuberculosis en humanos, sin embargo, la transmisión zoonótica de Mycobacterium bovis de animales a humanos, principalmente a individuos inmunocomprometidos, es de gran impacto en salud pública. La necesidad de diseñar métodos rápidos y precisos que permitan diferenciar entre M. tuberculosis y M. bovis ha conducido al desarrollo de estrategias de identificación genotípica. El objetivo de este estudio fue evaluar el poder discriminatorio de un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en formato múltiple para diferenciar entre aislados clínicos de M. tuberculosis y M. bovis. Se estandarizaron condiciones para amplificación simultánea con oligonucleótidos dirigidos a secuencias de genes Rv0577 y Rv1510. Rv0577 es específico de micobacterias del Complejo M. tuberculosis y Rv1510 se localiza en regiones polimórficas (RD4) del genoma de cepas del complejo M. tuberculosis, ausentes en M. bovis y M. bovis BCG, permitiendo diferenciar entre estas dos especies del complejo M. tuberculosis. Para evaluar la especificidad del ensayo se analizaron 46 aislados clínicos. El amplicón correspondiente a Rv0577 se detectó en todos los aislados clínicos del complejo M. tuberculosis, mientras que el producto de 1033 pb Rv1510 (RD4), se observó exclusivamente en M. tuberculosis, pero no en M. bovis, ni en M. bovis BCG, demostrando la especificidad de este ensayo de RCP para identificar micobacterias del complejo M.tuberculosis y diferenciar entre M. tuberculosis y M. bovis en una única reacción de amplificación. Dada la especificidad del ensayo, éste puede ser aplicado para la identificación y diferenciación de micobacterias del complejo M. tuberculosis en muestras clínicas, para hacer control de calidad de productos derivados de animales con sospechas de infección y desarrollar estudios a gran escala de transmisión zoonótica de M. bovis en poblaciones vulnerables.