Comparación de tres soluciones hiposmóticas para evaluar la integridad de la membrana plasmática del espermatozoide criopreservado y descongelado de toro

Abstract

El objetivo de este trabajo fue comparar la sensibilidad de tres medios hiposmóticos (HOST) para valorar la integridad funcional de la membrana plasmática (IFMP) de espermatozoides obtenidos de semen criopreservado de 12 toros. Se compararon tres soluciones con diferentes osmolaridades (0; 102 y 154 mOsm/Kg) que se incubaron a 37°C en baño María. La solución con 0 mOsm/kg (A: agua ultra pura) fue incubada durante cinco minutos (min), mientras que las dos restantes con diferentes concentraciones de cloruro de sodio se incubaron durante 30 min. La solución B y C constan de medios hiposmóticos a 102 y 154 mOsm/kg, respectivamente. Se tomaron tres muestras (100 µL) de semen descongelado por toro que se introdujeron en viales que contenían 1000 µL de cada solución hiposmótica. Sobre frotis realizados con cada medio y teñidos con Eosina-nigrosina (EN) se evaluaron 100 espermatozoides para determinar (en conjunto) el porcentaje de viabilidad y de flagelos reaccionados (FR). La asociación del HOST con la EN fue realizada para identificar los espermatozoides vivos o muertos con FR o intactos. Los resultados demuestran mejores porcentajes de espermatozoides con FR para las soluciones B (49,75 ± 4,17) y C (56,33 ± 4,17) versus la solución A (32,16 ± 4,17) (P<0,05). Cuando se asociaron los FR con el porcentaje de supervivencia se observó la misma tendencia (A= 8,75 ± 1,56 versus B: 26,33 ± 3,46 y C: 29,41 ± 2,67). Estos valores indican que las condiciones B y C son medios hiposmóticos apropiados para la valoración de los espermios, ya que propician la torsión helicoidal del flagelo manteniendo la IFMP del espermatozoide en el 52% de los casos. Se concluye que la condición osmolar A no se recomienda debido a que causa pérdida de la IFMP y muerte celular, lo cual quedó en evidencia al apreciar que solo un 8% de espermatozoides con flagelos reaccionados sobreviven luego del un estrés osmótico tan bajo.