Estandarización del sistema PCR-RFLP-HpyCH4V de la región LCR-E6 para la detección y tipificación del VPH en muestras de pacientes con lesiones intraepiteliales de alto grado

Abstract

El cáncer uterino es un problema importante en Venezuela. La Infección por VPH es uno de los principales inductores del cáncer en mucosas junto a otros factores ambientales ó inmunológicos. Uno de los métodos más sensibles para determinar la presencia del ADN del virus es la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa. En los últimos 20 años se han descrito alrededor de 77 genotipos de VPH y se han clasificado en tres grupos según su carácter oncogénico. Una teoría formulada por varios autores afirma que en un proceso cancerígeno hay integración del genoma del virus en el genoma del hospedador. Este trabajo presenta el desarrollo de un sistema de detección para 12 tipos de VPH que emplea como secuencia diana la región LCR-E6. Para la tipificación se emplea el método de Polimorfismo de los Fragmentos de Restricción con la endonucleasa HpyCH4V. El sistema desarrollado con el Oligonucleótidos NATBC detecta muestras donde el ADN del virus está integrado en el genoma de la célula hospedadora, al contrario del sistema de Oligonucleótidos MY09MY11, ayudando de esta manera al diagnóstico en pacientes con Lesiones Intraepiteliales. La tipificación con RFLP-HpyCH4V muestra patrones distinguibles uno de otros, haciéndolo accesible y sencillo como método para estudios poblacionales.